在当代生命科学征询中，重组卵白抒发工夫饰演着至关紧要的变装。重组卵白是应用了重组 DNA 或重组 RNA 的工夫而取得的卵白质。DNA 重组工夫是出产多数特定卵白质的一种紧要体式竞猜大厅真人，该工夫通过基因重组将多种开头的遗传物资荟萃在一说念，创造出基因组中自然不存在的 DNA 序列。抒发载体是一种 DNA 分子，捎带特定基因插足宿主细胞，并诈欺细胞的卵白质合成机制来出产基因编码的卵白质。

抒发载体必须包含基因抒发所需的元素，如动手子、翻译动手序列、阻隔密码子和转录阻隔序列。此外，为了便于卵白质的纯化，抒发载体连接带有纯化标签。克隆载体是一种能将外来 DNA 带入宿主细胞并复制预备基因的 DNA 分子，不包含卵白质抒发调控元件。当今有多种卵白质抒发系统可供采取，如大肠杆菌、酵母、虫豸细胞和哺乳动物细胞，因此有很多不同的抒发载体可用于不同的抒发系统。采取合适的抒发载体有助于告成抒发预备卵白质，并在必要时有助于卵白质的纯化。

载体采取主要沟通的身分

1. 抒发系统

领先需要细目一种抒发系统专用的抒发载体，常见的抒发系统有：

大肠杆菌抒发系统：pET系列（pET28a、pET30a、pET43.1 a等），pGEX4T-1、pBAD24、pGADT7、pQE-30等 哺乳动物细胞抒发系统 酵母细胞抒发系统 虫豸细胞抒发系统 无细胞抒发系统

图 1 用于大肠杆菌抒发系统的抒发载体 pCzn1

图2 哺乳动物细胞瞬转抒发进程图

2. 载体大小

这里惟一需要沟通的是，你是在处罚大的 DNA 片断已经小的 DNA 片断。为了操作便捷，载体必须是相对较小的分子。过大的载体可能会影响复制并导致沉稳性问题。连接，质粒不错处罚长达 15 kb 的插入片断。但也有一些罕见的质粒不错处罚更大的插入物。

3. 卵白标签protein tag

卵白标签大多为较短的短肽，一般会通抒发在见识基因的3’端或5'端，如flag、HA、myc和his等。有了标签，在短少针对见识卵白的抗体时就不错很便捷的对见识卵白作念检测了

4. 预备卵白应用

笔据预备卵白的下流应用，抒发载体可能含有其他标签和会通卵白。随机，特定的标签有助于征询预备卵白的功能和卵白与卵白之间的互相作用。淌若您思进一步了解预备卵白的功能，标签和会通卵白是灵验的用具，不错让您进行 Western 踪迹、免疫千里淀、pull-down 分析（体外卵白荟萃分析）或其他履行。

5. 动手子（promoter, P）

与RNA团聚酶特异性荟萃，促进基因转录的DNA序列。含有RNA 团聚酶特异性荟萃和转录肇始所需的保守序列。真核细胞含有三类RNA团聚酶，因此真核动手子还分为I、II、III类动手。常见抒发简略过抒发皆是II类动手子，而III类动手子如U6、H1，动手小片断如miRNA、shRNA、sgRNA等，其用于构建shRNA和sgRNA载体进行敲低或敲除操作。Ⅱ型动手子在使用特色上又可分为三大类：构成型动手子（粗鄙性动手子）、组织特异性动手子、交流型动手子。

6. 采取记号（selectable markers）

可采取记号是一种基因，它能赋予含有预备基因（重组载体）的宿主细胞一种相宜东说念主工采取的性状。多为抗生素抗性基因，便捷后续筛选阳性克隆。原核细胞筛选记号常用的是氨苄青霉素/氨苄西林Amp、氯霉素Cam、卡那霉素Kan、四环素Tet等；真核细胞筛选记号用的是嘌呤霉素Puro，新霉素neo/G418，潮霉素Hyg或Hygro等。质粒图谱顶用抗生素缩写+R示意，R代表resistance，如AmpR和PuroR等。

任何卵白质抒发系统的最终预备皆是出产出高质高量的重组卵白质。抒发载体有助于将外来遗传物资导入宿主细胞，使见识基因在宿主细胞中抒发，并促进见识卵白质的毅然和纯化。抒发载体对重组卵白的出产起着决定性作用，因此采取理思的抒发载体意旨紧要。

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